Dithiothreitol (DTT) ແມ່ນສານຫຼຸດຜ່ອນການນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປ, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າສານເພີ່ມສີຂຽວໃຫມ່.ມັນເປັນທາດປະສົມອິນຊີໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ມີສອງກຸ່ມ mercaptan (-SH).ເນື່ອງຈາກການຫຼຸດຜ່ອນຄຸນສົມບັດແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງມັນ, DTT ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການທົດລອງຊີວະເຄມີແລະໂມເລກຸນ.
ບົດບາດຕົ້ນຕໍຂອງ DTT ແມ່ນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຜູກພັນ disulfide ໃນທາດໂປຼຕີນແລະ biomolecules ອື່ນໆ.ພັນທະບັດ disulfide ແມ່ນສ່ວນຫນຶ່ງທີ່ສໍາຄັນຂອງການພັບທາດໂປຼຕີນແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງ, ແຕ່ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດລອງບາງຢ່າງ, ເຊັ່ນ: ການວິເຄາະ SDS-PAGE ທີ່ຫຼຸດລົງ, ການປະສົມທາດໂປຼຕີນແລະການພັບ, ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຜູກພັນ disulfide ກັບສອງກຸ່ມ thiol ເພື່ອ unravel ໂຄງສ້າງທາງກວ້າງຂອງພື້ນ. ທາດໂປຼຕີນ.DTT ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບພັນທະບັດ disulfide ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພວກມັນໃຫ້ກັບກຸ່ມ mercaptan, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເປີດໂຄງສ້າງທາງກວ້າງຂອງທາດໂປຼຕີນແລະເຮັດໃຫ້ມັນງ່າຍຕໍ່ການວິເຄາະແລະການຈັດການ.
DTT ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປົກປ້ອງກິດຈະກໍາ enzyme ແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງ.ໃນບາງປະຕິກິລິຍາຂອງ enzyme-catalyzed, ກິດຈະກໍາຂອງ enzyme ອາດຈະຫຼຸດລົງໂດຍການອອກຊິເຈນ.DTT ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບສານ oxidants ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພວກມັນໃຫ້ກັບສານທີ່ບໍ່ມີອັນຕະລາຍ, ດັ່ງນັ້ນການປົກປ້ອງກິດຈະກໍາແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງ enzyme.
ເມື່ອປຽບທຽບກັບສານຫຼຸດຜ່ອນແບບດັ້ງເດີມເຊັ່ນ: β-mercaptoethanol (β-ME), DTT ຖືກຖືວ່າເປັນຕົວແທນການຫຼຸດຜ່ອນທີ່ປອດໄພກວ່າແລະມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຫຼາຍ.ມັນບໍ່ພຽງແຕ່ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງໃນການແກ້ໄຂທີ່ມີນ້ໍາ, ແຕ່ຍັງຮັກສາຄຸນສົມບັດການຫຼຸດຜ່ອນຂອງມັນພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂອຸນຫະພູມສູງແລະອາຊິດຖານ.
ການນໍາໃຊ້ DTT ແມ່ນຂ້ອນຂ້າງງ່າຍດາຍ.ໂດຍທົ່ວໄປ, DTT ຖືກລະລາຍໃນ buffer ທີ່ເຫມາະສົມແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເພີ່ມເຂົ້າໃນລະບົບການທົດລອງ.ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ DTT ຕ້ອງໄດ້ຮັບການກໍານົດໂດຍອີງຕາມການທົດລອງສະເພາະ, ແລະໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຖືກນໍາໃຊ້ໃນລະດັບ 0.1-1mM.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່ໍາສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນແລະສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນພິດຂອງ cytotoxic ເນື່ອງຈາກການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນທີ່ເກີນເປົ້າຫມາຍ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ສູງຂຶ້ນອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດພາລະການເຜົາຜະຫລານຂອງເຊນຫຼາຍເກີນໄປ, ຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງເຊນແລະປະສິດທິພາບການສະແດງອອກ.
ວິທີການກໍານົດຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດສາມາດເປັນການປະເມີນລະດັບການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກເປົ້າຫມາຍໂດຍການດໍາເນີນການທົດສອບ induction IPTG ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ການທົດສອບວັດທະນະທໍາຂະຫນາດນ້ອຍສາມາດປະຕິບັດໄດ້ໂດຍໃຊ້ລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ IPTG (ຕົວຢ່າງ: 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ແລະອື່ນໆ) ແລະຜົນກະທົບການສະແດງອອກໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດຖືກປະເມີນໂດຍການກວດສອບລະດັບການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກເປົ້າຫມາຍ (ເຊັ່ນ: Western. ການກວດຫາ blot ຫຼື fluorescence).ອີງຕາມຜົນການທົດລອງ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ມີຜົນກະທົບການສະແດງອອກທີ່ດີທີ່ສຸດໄດ້ຖືກເລືອກເປັນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ນອກຈາກນັ້ນ, ທ່ານຍັງສາມາດອ້າງອີງເຖິງວັນນະຄະດີທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຫຼືປະສົບການຂອງຫ້ອງທົດລອງອື່ນໆເພື່ອເຂົ້າໃຈລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ IPTG ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດລອງທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເພີ່ມປະສິດທິພາບແລະປັບຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນການທົດລອງ.
ມັນເປັນສິ່ງສໍາຄັນທີ່ຈະສັງເກດວ່າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດອາດຈະແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມລະບົບການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ທາດໂປຼຕີນຈາກເປົ້າຫມາຍແລະເງື່ອນໄຂຂອງການທົດລອງ, ດັ່ງນັ້ນມັນຈຶ່ງດີທີ່ສຸດທີ່ຈະເພີ່ມປະສິດທິພາບໃນແຕ່ລະກໍລະນີ.
ສະຫຼຸບສັງລວມ, DTT ແມ່ນຕົວແທນການຫຼຸດຜ່ອນການນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປທີ່ສາມາດນໍາໃຊ້ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຜູກພັນ disulfide ໃນທາດໂປຼຕີນແລະຊີວະໂມເລກຸນອື່ນໆແລະປົກປ້ອງກິດຈະກໍາຂອງ enzyme ແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງ.ມັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຊີວະເຄມີແລະການທົດລອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ.
ເວລາປະກາດ: ກັນຍາ-28-2023