Dithiothreitol (DTT) ເປັນສານຫຼຸດຄວາມໜຽວທີ່ນິຍົມໃຊ້ກັນທົ່ວໄປ, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າສານເຕີມແຕ່ງສີຂຽວໃໝ່. ມັນເປັນສານປະກອບອິນຊີໂມເລກຸນຂະໜາດນ້ອຍທີ່ມີກຸ່ມ mercaptan ສອງກຸ່ມ (-SH). ເນື່ອງຈາກຄຸນສົມບັດການຫຼຸດຜ່ອນ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງມັນ, DTT ຈຶ່ງຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການທົດລອງທາງຊີວະເຄມີ ແລະ ຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ.
ບົດບາດຫຼັກຂອງ DTT ແມ່ນເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພັນທະໄດຊູນໄຟດ໌ໃນໂປຣຕີນ ແລະ ຊີວະໂມເລກຸນອື່ນໆ. ພັນທະໄດຊູນໄຟດ໌ເປັນສ່ວນສຳຄັນຂອງການພັບ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງໂປຣຕີນ, ແຕ່ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດລອງບາງຢ່າງ, ເຊັ່ນ: ການວິເຄາະ SDS-PAGE ທີ່ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນໄດ້, ການລວມຕົວຂອງໂປຣຕີນຄືນໃໝ່ ແລະ ການພັບ, ມັນຈຳເປັນຕ້ອງຫຼຸດຜ່ອນພັນທະໄດຊູນໄຟດ໌ລົງເປັນສອງກຸ່ມ thiol ເພື່ອເປີດເຜີຍໂຄງສ້າງທາງພື້ນທີ່ຂອງໂປຣຕີນ. DTT ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບພັນທະໄດຊູນໄຟດ໌ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພວກມັນລົງເປັນກຸ່ມ mercaptan, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເປີດໂຄງສ້າງທາງພື້ນທີ່ຂອງໂປຣຕີນ ແລະ ເຮັດໃຫ້ມັນງ່າຍຕໍ່ການວິເຄາະ ແລະ ຈັດການ.
DTT ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປົກປ້ອງກິດຈະກໍາ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງເອນໄຊມ໌. ໃນບາງປະຕິກິລິຍາທີ່ມີຕົວເລັ່ງປະຕິກິລິຍາກັບເອນໄຊມ໌, ກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊມ໌ອາດຈະຖືກຫຼຸດລົງໂດຍຕົວຜຸພັງ. DTT ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບຕົວຜຸພັງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພວກມັນໃຫ້ເປັນສານທີ່ບໍ່ເປັນອັນຕະລາຍ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງປົກປ້ອງກິດຈະກໍາ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງເອນໄຊມ໌.
ເມື່ອປຽບທຽບກັບຕົວຫຼຸດຜ່ອນແບບດັ້ງເດີມເຊັ່ນ β-mercaptoethanol (β-ME), DTT ຖືກຖືວ່າເປັນຕົວຫຼຸດຜ່ອນທີ່ປອດໄພ ແລະ ໝັ້ນຄົງກວ່າ. ມັນບໍ່ພຽງແຕ່ໝັ້ນຄົງໃນສານລະລາຍໃນນໍ້າເທົ່ານັ້ນ, ແຕ່ຍັງຮັກສາຄຸນສົມບັດການຫຼຸດຜ່ອນຂອງມັນໄວ້ພາຍໃຕ້ອຸນຫະພູມສູງ ແລະ ສະພາບກົດ-ເບສ.
ການໃຊ້ DTT ແມ່ນຂ້ອນຂ້າງງ່າຍດາຍ. ໂດຍທົ່ວໄປ, DTT ຈະຖືກລະລາຍໃນບັຟເຟີທີ່ເໝາະສົມ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນເພີ່ມເຂົ້າໃນລະບົບການທົດລອງ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ DTT ຈຳເປັນຕ້ອງໄດ້ກຳນົດຕາມການທົດລອງສະເພາະ, ແລະ ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວແມ່ນໃຊ້ໃນລະດັບ 0.1-1 mM. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່ຳສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງຈຸລັງ ແລະ ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເປັນພິດຂອງຈຸລັງເນື່ອງຈາກການສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປຂອງໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດພາລະການເຜົາຜານອາຫານຂອງຈຸລັງຫຼາຍເກີນໄປ, ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການເຕີບໂຕຂອງຈຸລັງ ແລະ ປະສິດທິພາບການສະແດງອອກ.
ວິທີການກຳນົດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດແມ່ນການປະເມີນລະດັບການສະແດງອອກຂອງໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍໂດຍການດຳເນີນການທົດສອບການກະຕຸ້ນ IPTG ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ການທົດສອບການເພາະເລี้ยงຂະໜາດນ້ອຍສາມາດປະຕິບັດໄດ້ໂດຍໃຊ້ລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ IPTG (ເຊັ່ນ 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ແລະອື່ນໆ) ແລະ ຜົນກະທົບຂອງການສະແດງອອກໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດປະເມີນໄດ້ໂດຍການກວດຈັບລະດັບການສະແດງອອກຂອງໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍ (ເຊັ່ນ ການກວດຈັບ Western blot ຫຼື ການກວດຈັບ fluorescence). ອີງຕາມຜົນການທົດລອງ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ມີຜົນກະທົບການສະແດງອອກທີ່ດີທີ່ສຸດໄດ້ຖືກເລືອກເປັນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ນອກຈາກນັ້ນ, ທ່ານຍັງສາມາດອ້າງອີງເຖິງເອກະສານທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ ຫຼື ປະສົບການຂອງຫ້ອງທົດລອງອື່ນໆ ເພື່ອເຂົ້າໃຈລະດັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ IPTG ທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການທົດລອງທີ່ຄ້າຍຄືກັນ, ແລະຈາກນັ້ນປັບປຸງ ແລະ ປັບຕາມຄວາມຕ້ອງການດ້ານການທົດລອງ.
ມັນເປັນສິ່ງສຳຄັນທີ່ຄວນສັງເກດວ່າຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດອາດແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມລະບົບການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ໂປຣຕີນເປົ້າໝາຍ ແລະ ເງື່ອນໄຂການທົດລອງ, ສະນັ້ນມັນດີທີ່ສຸດທີ່ຈະເພີ່ມປະສິດທິພາບເປັນແຕ່ລະກໍລະນີ.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, DTT ເປັນຕົວຫຼຸດຜ່ອນທີ່ນິຍົມໃຊ້ກັນທົ່ວໄປ ເຊິ່ງສາມາດໃຊ້ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນພັນທະ disulfide ໃນໂປຣຕີນ ແລະ ຊີວະໂມເລກຸນອື່ນໆ ແລະ ເພື່ອປົກປ້ອງກິດຈະກຳ ແລະ ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງເອນໄຊມ໌. ມັນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການທົດລອງທາງຊີວະເຄມີ ແລະ ຊີວະໂມເລກຸນ.
ເວລາໂພສ: ວັນທີ 28 ກັນຍາ 2023